Průtoková cytometrie je technika pro rychlé měření jednotlivých částic nebo buněk, které procházejí snímacím místem. Důležitou vlastností cytometrické analýzy je skutečnost, že je prováděno měření každé částice nebo buňky a nejde jen o průměrné hodnoty měřené suspenze. Průtokový cytometr je běžně vybaven argonovým laserem, který umožňuje analýzu mnoha buněčných parametrů na základě odklonu laserového paprsku. Úroveň tohoto odklonu odpovídá velikosti a granularitě (denzitě) procházejících částic nebo buněk (např. lymfocyty jsou malé a denzní buňky, naopak granulocyty jsou buňky větší s vyšší denzitou).

      Metodika průtokové cytometrie při barvení buněk s fluorescentním barvivem, které je konjugováno s monoklonálními protilátkami, umožňuje určit přítomnost, denzitu i distribuci cytoplazmatických znaků (při použití metod itracelulárního barvení i intracelulárních znaků). Tyto cytoplazmatické znaky jako tzv. diferenciační znaky (Clusters of Differentiation - CD) umožňují určovat specifické buněčné subpopulace - například CD4+ T lymfocyty značené monoklonální protilátkou proti znaku CD4 na jejich povrchu.

      Aplikací metody průtokové cytometrie je celá řada. Na našem pracovišti využíváme stanovení tří CD znaků v jednom vzorku, což je doporučený standard pro rutinní stanovení lymfocytárních subpopulací například u HIV-pozitivních osob. Metodiku trojbarevné cytometrie dále využíváme ve výzkumu role buněčné imunity u některých infekčních chorob (především neuroinfekcí a HIV/AIDS).

Pracovní zaměření

      Stanovování lymfocytárních subpopulací v krvi u pacientů s HIV infekcí, nemocných s těžkými infekcemi (například sepse a neuroinfekce) a rovněž u osob s imunodeficiencemi ambulantně sledovaných nebo hospitalizovaných na Infekční klinice.

Výzkum

      Ve výzkumu se laboratoř zaměřuje na využití aktivačních znaků jako klinických a diagnostických markerů HIV infekce a problematiku neuroimunologie u serózních a bakteriálních meningitid (studium role imunitní odpovědi při zánětlivém poškození CNS při neuroinfekcích).

Využívané metodiky

      Trojbarevná průtoková cytometrie (průtokový cytometr FACScalibur od firmy Becton-Dickinson, San José, CA, USA), kterou jsou fenotypizovány především lymfocyty a monocyty/makrofágy získané z krve a z mozkomíšního moku. Další využívanou cytometrickou metodikou je Cytokine Bead Array pro stanovování cytokinů (např. interleukin [IL]-1, 6, 8, 10 a 12 a tumor necrosis factor [TNF]-a) v biologických vzorcích (sérum a mozkomíšní mok).

Charakteristika grantových projektů

Vybrané publikace

• Holub M, Beran O, Džupová O, Hnyková J, Lacinová Z, Příhodová J, Procházka B, Helcl M. Cortisol levels in cerebrospinal fluid correlate with severity and bacterial origin of meningitis. Critical Care. 2007;11(2):R41,1-9 (IF 3,12).
• Holub M, Scheinostová M, Fišerová A, Beran O, Kalmusová J, Musílek M, Křížová P. Neisseria meningitidis strains from patients with invasive meningococcal disease differ in stimulation of cytokine production. Folia Microbiologica. 2007;52(5):525-28 (IF 0,92).
• Bartovská Z, Beran O, Rozsypal H, Holub M. HIV-1-specific CD8+ T cells do not correlate with viral load in HIV-1-positive patients. Acta virologica. 2007;51:59-61 (IF 0,79).
• Holub M, Beran O, Lacinová Z, Cinek O, Chalupa P. Interferon-g and cortisol levels in cerebrospinal fluid and its relationship to the etiology of aseptic meningoencephalitis. Prague Medical Report. 2006;107(3):343-53.
• Beran O, Hobstová J. Patofyziologie a léčba bakteriální meningitidy. Čes Slov Neurol Neurochir. 2005;68/101(6):360–67 (IF 0,04).
• Holub M, Beran O, Kalanin J, Hnyková J, Špála J, Rozsypal H. Antigen CD38 jako ukazatel pro imunologické sledování HIV pozitivních osob. Klin Mikrobiol Inf Lék. 2004;10(5):229-35.
• Holub M, Helcl M, Beran O, Příhodová J, Hnyková J. Kinetics of immune parameters in a patient with sepsis caused by Streptococcus pyogenes treated with activated protein C. Scandinavian Journal of Infectious Diseases. 2004;36(6-7):485-88 (IF 1,7).
• Beran O, Holub M, Kalanin J, Špála J, Staňková M. CD38 expression on CD8+ T cells in HIV-positive adults treated by HAART. Acta Virol. 2003;47:121-124.
• Holub M, Klučková Z, Helcl M, Příhodová J, Rokyta R, Beran O. Lymphocyte subset numbers depend on the bacterial origin of sepsis. Clin Microbiol Infect. 2003;9:202-211.
• Rokyta R jr, Holub M, Hanzlíková J, et al. Effect of continuous veno-venous hemodiafiltration on monocyte and lymphocyte HLA-DR expression in critically ill patients. Int J Artif Organs. 2002;25:1066-1073.
• Holub M, Klučková Z, Beran O, Aster V, Lobovská A. Lymphocyte subset numbers in cerebrospinal fluid: comparison of tick-borne encephalitis and neuroborreliosis. Acta Neurol Scand. 2002;106:302-308.
• Holub M, Klučková Z, Beneda B, Hužička I, Hobstová J, Lobovská A. Changes in lymphocyte subpopulations and CD3+/DR+ expression in sepsis. Clin Microbiol Infect. 2000;6:657-660.
• Holub M, Špíšek R, Roháčová H, Hančil J, Aster V, Lobovská A. Lymfocytární subpopulace u aseptické meningitidy v likvoru a krvi. Čes Slov Neurol Neurochir. 2000;96:255-260.